酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）是一種用途廣泛且應(yīng)用廣泛的生化技術(shù)，用于檢測(cè)和定量特定分子，例如蛋白質(zhì)、肽、抗體和小分子。不同類型ELISA—直接法、間接法、夾心法和競(jìng)爭(zhēng)法提供了針對(duì)各種研究、診斷和臨床應(yīng)用的獨(dú)特方法。接下來上海通蔚生物為大家介紹每種類型的ELISA及其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)、注意事項(xiàng)和應(yīng)用。

直接ELISA

在直接ELISA中，抗原直接固定在微孔板表面，接著加入針對(duì)該抗原的標(biāo)記酶標(biāo)抗體，該抗體直接與抗原結(jié)合。直接ELISA法相對(duì)簡(jiǎn)單快捷，其靈敏度低于其它方法。

優(yōu)點(diǎn)：

操作步驟簡(jiǎn)單、直接

無需二抗，避免交互反應(yīng)

缺點(diǎn)：靈敏度較低

抗體成本高

應(yīng)用：直接ELISA可用于篩選生物樣本中的抗原，定量可直接與抗體結(jié)合而不受干擾的抗原，并由于其簡(jiǎn)單性和快速的周轉(zhuǎn)時(shí)間而用于快速診斷測(cè)試。

間接ELISA

在間接ELISA中，抗原直接固定在微孔板表面，加入針對(duì)該抗原的未標(biāo)記一抗，然后加入與一抗結(jié)合的標(biāo)記二抗。間接ELISA法可以放大信號(hào)，提高靈敏度。

優(yōu)點(diǎn)：放大信號(hào)

林敏度高

可以檢測(cè)多種抗原

缺點(diǎn)：步驟復(fù)雜

非特異性結(jié)合風(fēng)險(xiǎn)增加

應(yīng)用：間接ELISA可以檢測(cè)和量化血清或其他生物液體中的抗體，篩選大量樣本的抗體反應(yīng)（例如，在血清學(xué)調(diào)查中），并在疫苗開發(fā)和免疫反應(yīng)研究中確定抗體滴度。

夾心ELISA

夾心ELISA法是將針對(duì)目標(biāo)抗原的特異性捕獲抗體固定在微量滴定板上。加入含抗原的樣品，如果存在抗原，則該抗原會(huì)與捕獲抗體結(jié)合。然后，加入針對(duì)該抗原不同表位的、帶酶標(biāo)記的特異性檢測(cè)抗體，與抗原形成“夾心”結(jié)構(gòu)。之后直接加入底物，即可通過顯色進(jìn)行檢測(cè)。”

優(yōu)點(diǎn)：高特異性和靈敏性

不容易受到特異性結(jié)合的干擾

適用于檢測(cè)復(fù)雜生物樣本中的抗原

缺點(diǎn)：

需要兩種能夠識(shí)別抗原上不同表位的特異性抗體。

由于需要配對(duì)抗體，技術(shù)要求更高，且成本可能較高。

應(yīng)用：夾心ELISA的應(yīng)用示例包括量化復(fù)雜生物樣本（例如血清、組織裂解物）中的特定抗原、檢測(cè)疾病診斷中的生物標(biāo)志物（例如檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物、細(xì)胞因子）以及監(jiān)測(cè)研究和臨床環(huán)境中的蛋白質(zhì)表達(dá)水平。

競(jìng)爭(zhēng)ELISA

將特異性的捕獲抗體預(yù)先包被在微量滴定板上。然后，將含有未知量抗原的樣品與已知量的標(biāo)記抗原（與酶偶聯(lián)）混合后，一同加入到孔中。樣品中的抗原和標(biāo)記抗原會(huì)競(jìng)爭(zhēng)與板上有限的捕獲抗體結(jié)合。樣品中的抗原越多，能結(jié)合到板上的標(biāo)記抗原就越少，因此最終的顯色信號(hào)就越弱。信號(hào)強(qiáng)度與樣品抗原的濃度成反比。競(jìng)爭(zhēng)性ELISA適用于定量小分子或檢測(cè)抑制劑。

優(yōu)點(diǎn)：

適用于檢測(cè)小分子或抑制劑。

可以根據(jù)競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合量化抗原濃度。

提供相對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)曲線的分析物濃度的直接測(cè)量。

可以基于直接、間接或夾心ELISA

缺點(diǎn)：

通常比夾心法或間接ELISA靈敏度低。

需要仔細(xì)優(yōu)化抗原和抗體濃度。

更容易受到檢測(cè)條件變化的影響而導(dǎo)致結(jié)果受到影響。

應(yīng)用：競(jìng)爭(zhēng)性ELISA的一些應(yīng)用包括檢測(cè)和量化小分子或抑制劑（例如藥物、激素）、評(píng)估病毒學(xué)和疫苗研究中的抗體中和作用，以及篩查食品、環(huán)境樣本或藥品中的污染物或殘留物。