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  • 大鼠對氧磷酶1(PON1)ELISA試劑盒

    規格：
    價格：￥
    • 品牌 : 通蔚生物
    • 目錄號 : TW2101
    • 應用 : 僅限于科研使用
    • 英文名 ：Rat PON1 ELISA KIT
    • 貨期 : 現貨
    • 靈敏度 ：0.08ng/mL
    • 規格 ：48T/96T
    • 檢測范圍 ：0.157 ~ 10ng/mL
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簡介
對氧磷酶1（PON1）也被稱為A酯酶、高半胱氨酸硫酸鹽酶或血清芳基磷酸酶1，是一種在人類中由PON1基因編碼的酶，PON1是一個多基因家族中第一個被發現的成員，該家族還包括PON2和PON3，它們的基因在7號染色體上彼此相鄰，人類PON1是一種由354個氨基酸組成的糖蛋白，分子量為43000道爾頓，在循環中與高密度脂蛋白結合，X-射線晶體學顯示PON1的結構是一個6葉螺旋槳，有一個獨特的蓋子結構覆蓋活性部位通道，允許與HDL結合，PON1負責水解有機磷農藥和神經毒氣，其基因的多態性顯著影響該酶的催化能力。
檢測原理
本試劑盒采用雙抗體夾心法ELISA技術:將捕獲抗體包被于酶標板上，捕獲樣品及標準品中的待測物PON1，清洗后，再加入生物素標記的檢測抗體進行孵育后清洗，形成“捕獲抗體-抗原-檢測抗體”免疫復合物，隨后加入鏈霉親和素偶聯的辣根過氧化物酶進行孵育，待孵育結束后清洗，接著加入TMB顯色后，若樣本中有待測物則顯藍色，加入終止液停止反應。檢測過程中游離的成分均被洗去，用酶標儀在450 nm處測OD值，顏色的深淺和樣品中的待測物的含量呈正比，通過繪制標準曲線計算出樣本中PON1的濃度。
需要的其他材料
1.  酶標儀，包含450nm測定波長，同時包含600-680nm校正波長更佳；
2.  移液器及槍頭；
3.  蒸餾水或去離子水；
4.  100-1000 mL刻度量筒；
5.  洗瓶、排槍或自動微孔板清洗機；
6.  水平軌道微孔板振蕩器，能夠保持500±50 rpm的速度；
7.  用于稀釋標準品和樣品的試管。
樣品保存
樣品收集后若在 1 周內進行檢測的可保存于4℃，若不能及時檢測，請按一次使用量分裝，凍存于-20℃（1個月內檢測），或-80℃（6個月內檢測），避免反復凍融，標本溶血會影響最后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。
試劑準備工作
使用前將所有試劑置于室溫平衡30分鐘左右。

洗滌液/稀釋液配置

如果洗滌液/稀釋液（20×）有晶體析出，需在37℃下加熱?晶體全部溶解。用蒸餾水1:20稀釋（例如：1mL 濃縮洗滌液加入19mL的蒸餾水）

標準品配置
試劑盒中取出標準品，準備7個試管，先從200ng/mL標準品（200μL）按需吸取一定量用1×稀釋液稀釋至10ng/mL（例：50μL的標準品母液+950μL的1×稀釋液，制備得到1000μL的10ng/mL濃度標準品），隨后在6個試管中分別加入500μL的1×稀釋液，在這6個單獨的試管中將10ng/mL標準品依次2倍倍比稀釋至6個梯度，共配制7個濃度的標準品，依次為: 10ng/mL、 5ng/mL、 2.5ng/mL、 1.25ng/mL、 0.625ng/mL、 0.313ng/mL、 0.157ng/mL，從最高濃度標準品溶液中吸取500μL標準品到下一個試管中，輕輕吹打混勻，以此類推進行標準品的倍比稀釋（如圖所示），1×稀釋液用作零濃度標準品(0ng/mL)。

大鼠(PON1)ELISA試劑盒
抗體工作液配置
使用前10分鐘，將100×生物素化抗體于1000×g離心1分鐘，隨后用1×稀釋液將100×生物素化抗體稀釋成1×生物素化抗體工作液，根據所需用量當日配置當日使用。
酶結合物工作液配置
使用前10分鐘，將100×SA-HRP溶液于1000×g離心1分鐘，隨后用1×稀釋液將100×SA-HRP稀釋成1×SA-HRP工作液，根據所需用量配置。
備 注：如待測樣本中PON1濃度高于標準品最高值，請根據實際情況選擇適當的稀釋倍數。
結果的計算
計算標準品和樣本復孔的平均OD值并減去空白孔的OD值作為校正值。以濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出四參數邏輯函數的標準曲線(作圖時去掉空白組的值)?；蛘呤褂媚軌蛏伤膮颠壿嫞?-P）曲線擬合的計算機軟件來創建標準曲線。
若樣品OD值高于標準曲線上限，應適當稀釋后重測并在計算樣本濃度時乘以相應的稀釋倍數。
示例數據

以下數據和曲線僅供參考，實驗者需根據自己的實驗數據建立標準曲線。

標準品濃度(ng/mL)

10

5

2.5

1.25

0.625

0.313

0.157

0

OD值

2.567

1.73

0.963

0.768

0.398

0.212

0.125

0.067

校正OD值

2.500

1.663

0.896

0.701

0.331

0.145

0.058

0


下圖所示標準曲線僅供示例，結果計算應以同次試驗標準品所繪標準曲線為準計算樣本結果

大鼠(PON1)ELISA試劑盒

重復性
板內變異系數小于10%，板間變異系數小于10%。
靈敏度
經樣本測試，本試劑盒的檢測靈敏度為0.08ng/mL。
特異性
該試劑盒測定可識別重組大鼠PON1。
其他相關蛋白在稀釋緩沖液中制備為50ng/mL，并測定交叉反應性。沒有觀察到明顯的交叉反應。
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