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一文盤點細胞培養過程中細胞計數常見四種方法

發布時間:2025-03-11     發布作者:上海通蔚生物

  細胞培養技術是生命科學研究中不可或缺的工具,而準確的細胞計數則是確保實驗結果可靠性和可重復性的關鍵步驟之一。細胞數量的準確測定對于后續實驗,例如藥物篩選、轉染實驗、細胞功能分析等至關重要,否則可能導致實驗結果的偏差甚至失敗!本文將介紹幾種常見的細胞計數方法,并比較它們的優缺點。


  細胞計數方法


  目前細胞計數方法較多,在實驗室常見的技術方法有以下幾種:

  血細胞計數板法


  原理:利用血細胞計數板上的計數室,在顯微鏡下直接對細胞進行計數。計數室有固定的容積,通過計算一定容積內的細胞數量,進而推算出細胞懸液的細胞濃度。

  操作:將細胞懸液充分混勻后,取適量滴加到血細胞計數板的計數室上,使其自然流入,避免產生氣泡。在顯微鏡下,按照一定的順序對計數室內的細胞進行計數,根據計數公式計算細胞濃度。

  特點:操作簡單、成本低,可直接觀察細胞形態,但對于細胞懸液中細胞密度過低或過高時,計數誤差較大,且主觀性較強。

  臺盼藍染色法


  原理:活細胞的細胞膜具有選擇透過性,臺盼藍不能進入活細胞,而死細胞的細胞膜喪失了選擇透過性,可被臺盼藍染成藍色。通過顯微鏡下分別計數活細胞和死細胞的數量,可計算出細胞的存活率和細胞總數。

  操作:將細胞懸液與適量的臺盼藍染液混合,室溫下孵育一定時間后,取混合液滴加到血細胞計數板上,在顯微鏡下計數。

  特點:能區分活細胞和死細胞,可同時進行細胞計數和活力檢測,但對于一些細胞膜受損但仍具有代謝活性的細胞,可能會出現誤判。

  電子細胞計數器法


  原理:當細胞懸液通過一個小孔時,細胞會引起小孔內電阻的變化,從而產生一個電脈沖信號,電子細胞計數器可對這些電脈沖信號進行計數和分析,進而得到細胞的數量和大小分布等信息。

  操作:將細胞懸液加入到電子細胞計數器的樣品池中,設置好相關參數后,啟動儀器進行計數。

  特點:操作簡便、快速,計數準確,可同時得到多個細胞參數,但儀器價格較高,對細胞懸液的要求較高,細胞團塊或雜質可能會影響計數結果。

  流式細胞術


  原理:將細胞制成單細胞懸液,使其在鞘液的包裹下,逐個通過流式細胞儀的檢測區域。細胞通過激光照射時,會產生散射光和熒光信號,這些信號被光電探測器接收并轉化為電信號,由計算機進行分析和處理,從而得到細胞的數量、大小、熒光強度等信息。

  操作:先對細胞進行熒光標記等處理,然后將細胞懸液注入流式細胞儀,設置好檢測參數和分析門限等,即可得到細胞計數及相關分析結果。

  特點:可同時對多個參數進行分析,能準確區分不同類型的細胞,對細胞的活性和功能等也能進行檢測,但儀器昂貴,操作需要專業人員,且檢測成本較高。

  上述是細胞培養過程中細胞幾種技術方法,大家可以結合上述每種方法特點來選擇合適的方法,為后續實驗,例如藥物篩選、轉染實驗、細胞功能分析等提供可靠的結果!隨著技術的不斷發展,相信未來會出現更加便捷、精確的細胞計數方法,為生命科學研究提供更強有力的支持。



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