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PCR實驗步驟有哪些?一文解析三大步驟

發(fā)布時間:2025-03-06     發(fā)布作者:上海通蔚生物

  聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)作為一項革命性的技術(shù),極大地推動了分子生物學(xué)領(lǐng)域的發(fā)展,例如在近年來興起的CRISPR基因編輯技術(shù)中,PCR扮演著不可或缺的角色。從基礎(chǔ)研究到臨床應(yīng)用,PCR已成為分子診斷、基因組測序等領(lǐng)域的核心技術(shù)。為了更好地理解和應(yīng)用PCR技術(shù),深入了解其核心步驟至關(guān)重要。PCR的核心在于變性、退火和延伸三個步驟,通過循環(huán)往復(fù),實現(xiàn)DNA序列的體外擴增。下面,我們將詳細解析這三個步驟的具體操作和原理。

 

  PCR三個步驟

 

  PCR模擬了體內(nèi)DNA復(fù)制的部分過程。首先待擴增模版DNA模版加熱變性解鏈,隨后將反應(yīng)混合物冷卻到某一溫度,冷卻溫度可以使引物與它的靶序列發(fā)生退火,再將溫度升高使退火引物在DNA聚合酶作用下得以延伸。

 

  變性

 

  將DNA樣本經(jīng)過加熱至93℃左右30秒到1分鐘,使樣本雙鏈DNA解離成單鏈,為引物結(jié)合創(chuàng)造條件。

 

  退火

 

  樣本DNA經(jīng)過加熱后變性成單鏈后,將溫度將適于引物與模板DNA結(jié)合的溫度(55-65℃),引物與樣本DNA單鏈的互補序列配對結(jié)合。


 

  延伸

 

  溫度上升至TaqDNA聚合酶的最適工作溫度(72℃),聚合酶開始從引物的3'端開始添加脫氧核苷酸,合成新的DNA鏈,延伸時間通常為1分鐘/kb。

 PCR步驟

  上述3個步驟在一個循環(huán)中重復(fù)進行,每次循環(huán)都會使特定DNA片段的數(shù)量成倍增加,經(jīng)過25到40個循環(huán)后,可以達到數(shù)百萬倍的擴增效果。

 

  從最初的體外擴增到如今的數(shù)字PCR和微流控PCR,PCR技術(shù)正在不斷革新。盡管變性、退火和延伸三個基本步驟始終是PCR的核心,但新的技術(shù)正在提高PCR的靈敏度、特異性和通量。未來,PCR技術(shù)將在基因編輯、個性化醫(yī)療、合成生物學(xué)等領(lǐng)域發(fā)揮更大的作用。

 

  通蔚為科研實驗提供了PCR試劑盒,助理于科研成果。如果需要了解PCR試劑盒,歡迎前來咨詢!

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