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原代細胞培養有哪些步驟?一文盤點原代細胞培養4大步驟

發布時間:2025-02-13     發布作者:上海通蔚生物

  原代細胞是從組織機體中分離后并且在體外首次培養的細胞,在體外特定的培養條件下進行生長和繁殖,當細胞增值到一定密度(通常在70-90%匯合度)。為了維持細胞生長和狀態活力,需要將細胞轉移到含有新鮮生長的培養基新容器中進行傳代培養,也稱作繼代培養。相關閱讀:《什么是原代細胞


  原代細胞培養步驟


  1、組織收集和處理


  在無菌條件下,從動物或人體組織分離樣本。在收集和處理樣本可以采用消化酶、機械切割或抗體磁珠等方法,將組織分成單個細胞。組織分散成單個細胞后,需要進行洗滌、過濾(例如使用細胞篩)等步驟去除組織碎片和酶。


  2、細胞分離


  根據目標細胞的特性,選擇合適的細胞分離方法。常用的方法包括密度梯度離心、熒光激活細胞分選(FACS)、磁性激活細胞分選(MACS)等。例如,可以使用密度梯度離心法根據細胞密度的差異分離不同類型的細胞。篩選、沉淀和離心等步驟通常作為這些方法的輔助步驟,用于去除雜質、收集細胞或更換緩沖液等。


  3、培養基的選擇和準備


  根據分離出的細胞類型和實驗目的,選擇合適的培養基。不同的細胞類型對培養基的營養成分、生長因子和其他添加劑的需求不同。查閱文獻或參考ATCC等細胞庫的建議,選擇適合目標細胞的培養基配方。常用的基礎培養基包括DMEMRPMI-1640Ham'sF-12等,但通常需要根據具體細胞類型進行調整。


  4、細胞培養和傳代


  接下來對細胞進行培養和傳代。將分離純化后的細胞重懸于到合適的培養基中,然后接種到預先用細胞外基質(例如膠原蛋白、纖連蛋白、明膠等)包被的培養皿或培養瓶中,提供適當的溫度、濕度和CO2濃度等條件。原代細胞通常生長較慢且有限,當細胞達到一定匯合度(通常為70-90%)時,需要進行傳代。

原代細胞培養步驟


  原代細胞培養注意事項


  1、保持無菌條件


  細胞培養需要在無菌環境下進行,以防止細胞被細菌和真菌污染。在進行原代細胞培養之前,必須確保實驗環境和所操作工具、培養皿都處于嚴格的無菌狀態。使用消毒劑清潔操作區域,并穿戴合適個人防護設備,如穿戴無菌手套等。


  2、選擇合適的培養基


  根據細胞類型不同選擇合適的培養基,查閱文獻或參考ATCC等細胞庫的建議,選擇適合目標細胞的培養基配方。同時也要確保培養基和補充物質配方適合目標細胞類型,并檢查過期日期和存儲條件。


  3、細胞密度控制


  細胞密度對細胞生長和功能有重要影響。細胞密度過高會導致細胞過度接觸和競爭,影響細胞生長;細胞密度過低會導致細胞生長緩慢。因此,根據細胞類型和實驗要求控制細胞密度,通常通過細胞計數儀或顯微鏡進行細胞計數。


  4、注意細菌污染


  在細胞培養過程,需要定期檢查細胞是否受到細菌、真菌和病毒等污染。可以通過細菌培養、真菌培養和PCR等方法進行檢測。如發現細菌和真菌污染,需立即采取措施,例如更換培養器皿,使用抗生素或抗真菌藥物等。同時,也要注意實驗室清潔和消毒,以預防細胞污染的發生。


  5、實驗記錄


  準確記錄培養細胞的信息,包括來源、處理方法、傳代次數及細胞密度等。這些記錄對于實驗結果的解釋和后續研究非常重要。


  上述是對原代細胞培養有哪些步驟進行介紹,僅供參考!細節決定成敗,細菌、真菌、支原體、黑膠蟲,個個都是細胞殺手,在進行細胞培養之前要了解注意事項,爭取把實驗一次性做好。



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