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ELISA技術支持

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Elisa試劑盒故障排除

發布時間:2024-07-24     發布作者:上海通蔚生物

  在做ELISA實驗過程,難免會遇到故障,這些故障將會影響實驗進展及結果。了解ELISA實驗故障有助于發現問題,及時解決。下面由上海通蔚生物從ELISA試劑盒實驗過程整理一些常見的移液、高背景、信號弱或無信號和實驗結果超出預設的標準范圍方面介紹。

  移液問題


  ELISA移液操作是整個實驗的關鍵步驟之一,它直接影響實驗結果的準確性和可靠性。通常移液過程會遇到一些問題及解決辦法,如下表格:




常見問題


  • 使用不匹配的吸頭和移液器。
  • 不戴手套直接處理吸頭。
  • 多通道移液器吸頭連接不均勻。




解決方案


  • 務必使用移液器制造商推薦的吸頭,尤其是對于小容量移液器。
  • 處理吸頭時務必佩戴塑料手套以防止污染。




減少錯誤


  • 確保所有吸頭均牢固地安裝在多通道移液器上。
  • 目視檢查體積以盡量減少移液錯誤。
  • 徹底清洗后才能回收吸頭,并及時丟棄任何損壞的吸頭,尤其是與酶結合物一起使用的吸頭。



熟練使用


  • 適當的移液技術培訓對于保持 ELISA 檢測的準確性和一致性至關重要,從而獲得可靠的結果。



  高背景

  ELISA高背景是一個常見問題,會影響實驗結果的準確性和可靠性。通常ELISA高背景遇到一些問題及解決辦法,如下表格:




強烈或長時間的結合反應




  • 確保按照說明書的稀釋度使用結合物,并用終止緩沖液及時終止反應。




舊的底物或終止溶液



  • 使用新鮮的底物和終止液。終止液應清澈,而不是黃色。


反應未停止



  • 停止反應以防止繼續顯色。




延遲讀板




  • 加入終止液后立即讀板,以避免進一步顯色。




受污染的玻璃器皿或塑料




  • 使用干凈、消毒過的玻璃器皿和新鮮的塑料以防止污染。




孵化溫度不正確




  • 在正確的溫度下進行孵化,并驗證孵化器是否正確設置并正常運行。




非特異性抗體結合




  • 包括使用合適封閉緩沖液的封閉步驟,例如來自與二抗相同物種的 5-10% 血清或牛血清。確保孔經過預處理以防止非特異性附著。




清洗或阻塞不充分




  • 增加洗滌次數和持續時間。使用 BSA、酪蛋白或明膠等蛋白質阻斷劑來防止非特異性結合。在洗滌緩沖液中添加 Tween-20 等洗滌劑。




高抗體濃度




  • 降低一抗或二抗的濃度。如有必要,進行滴定。




底物溶液的過早制備




  • 將底物溶液立即混合,然后加入到板中。




受污染的儲液器、板密封劑、移液器吸頭或緩沖液



  • 每一步均使用干凈的器皿并準備新鮮緩沖液,以避免 HRP 污染。



  信號弱或無信號


  ELISA實驗中出現信號弱或無信號是一個常見問題,會影響實驗結果的準確性和可靠性。造成這個問題的原因有很多,以下是常見的原因以及解決方法,如下表格:



試劑處理


  • 按按照說明書以正確的順序添加試劑。
  • 嚴格按照試劑說明書的要求進行稀釋并根據需要重復實驗。



抗體濃度



  • 如果抗體濃度太低,則增加一抗或二抗濃度。
  • 為獲得更佳效果,請在 4°C 下孵育過夜??紤]使用抗體濃縮試劑盒。




抗體相容性


  • 確保一抗和二抗兼容且物種匹配。
  • 對于粘附性較差的情況,請使用經 ELISA 驗證的板并將涂層時間延長至 4°C 過夜。




夾心 ELISA



  • 確認捕獲和檢測抗體針對不同的表位。
  • 如果需要,請使用不同的抗體對或考慮其他 ELISA 類型。




標準與樣品


  • 確保標準品正確制備。如果標準品過期或降解,請使用新的小瓶。
  • 如果樣本不在可檢測范圍內,則進行連續稀釋并加入樣本以檢查是否存在干擾。




緩沖區注意事項




  • 確保緩沖液不含疊氮化物或充分清洗以避免抑制 HRP 活性。



  實驗結果超出預設的標準范圍


  實驗結果與預期值之間存在顯著差異,超出了預先設定的正常范圍,造成這個問題的原因有很多,以下是常見的原因以及解決方法,如下表格:



確定問題


  • 樣本中可能不含有分析物,或者分析物的含量低于可檢測水平。
  • 分析物濃度可能高于最高標準點。




低分析物濃度的解決方案


  • 使用更高的樣本量來提高檢測效果。
  • 尋求適合的協議修改的建議。




高分析物濃度的解決方案




  • 稀釋樣品并重新分析,以使其處于檢測的范圍內。



  上述為大家盤點ELISA實驗過程遇到的一些問題,希望這些問題可以作為參考,提高elisa實驗的準確性。上海通蔚也為大家提供代測服務,如果你想代測或遇到問題歡迎前來咨詢。
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