簡介

Corin蛋白(CRN)屬于Ⅱ型跨膜絲氨酸蛋白酶家族，分子量約為170-200k Da，N端位于細(xì)胞內(nèi)，有1個(gè)跨膜區(qū)，胞外區(qū)包含2個(gè)卷曲狀結(jié)構(gòu)（Frizzled，F(xiàn)z）、8個(gè)重復(fù)的低密度脂蛋白受體結(jié)構(gòu)（LDLR）、1個(gè)清道夫樣受體結(jié)構(gòu)（SR）以及保守的C-末端蛋白酶（Protease）區(qū)域，蛋白酶結(jié)構(gòu)域具有胰蛋白酶樣蛋白酶特有的保守結(jié)構(gòu)，包括含有組氨酸（Histidine，H）、天冬氨酸（Aspartic acid，D）和絲氨酸（Serine，S）酶活性基團(tuán)。

檢測原理

本試劑盒采用雙抗體夾心法ELISA技術(shù):將捕獲抗體包被于酶標(biāo)板上，捕獲樣品及標(biāo)準(zhǔn)品中的待測物CRN，清洗后，再加入生物素標(biāo)記的檢測抗體進(jìn)行孵育后清洗，形成“捕獲抗體-抗原-檢測抗體”免疫復(fù)合物，隨后加入鏈霉親和素偶聯(lián)的辣根過氧化物酶進(jìn)行孵育，待孵育結(jié)束后清洗，接著加入TMB顯色后，若樣本中有待測物則顯藍(lán)色，加入終止液停止反應(yīng)。檢測過程中游離的成分均被洗去，用酶標(biāo)儀在450 nm處測OD值，顏色的深淺和樣品中的待測需要的其他材料

1. 酶標(biāo)儀，包含450nm測定波長，同時(shí)包含600-680nm校正波長更佳；

2. 移液器及槍頭；

3. 蒸餾水或去離子水；

4. 100-1000 mL刻度量筒；

5. 洗瓶、排槍或自動(dòng)微孔板清洗機(jī)；

6. 水平軌道微孔板振蕩器，能夠保持500±50 rpm的速度；

7. 用于稀釋標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的試管。

樣品保存
樣品收集后若在 1 周內(nèi)進(jìn)行檢測的可保存于4℃，若不能及時(shí)檢測，請(qǐng)按一次使用量分裝，凍存于-20℃（1個(gè)月內(nèi)檢測），或-80℃（6個(gè)月內(nèi)檢測），避免反復(fù)凍融，標(biāo)本溶血會(huì)影響最后檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測。

試劑準(zhǔn)備工作

使用前將所有試劑置于室溫平衡30分鐘左右。

洗滌液/稀釋液配置

如果洗滌液/稀釋液（20×）有晶體析出，需在37℃下加熱?晶體全部溶解。用蒸餾水1:20稀釋（例如：1mL 濃縮洗滌液加入19mL的蒸餾水）

標(biāo)準(zhǔn)品配置

試劑盒中取出標(biāo)準(zhǔn)品，準(zhǔn)備7個(gè)試管，先從20ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品（200μL）按需吸取一定量用1×稀釋液稀釋至1000pg/mL（例：50μL的標(biāo)準(zhǔn)品母液+950μL的1×稀釋液，制備得到1000μL的1000pg/mL濃度標(biāo)準(zhǔn)品），隨后在6個(gè)試管中分別加入500μL的1×稀釋液，在這6個(gè)單獨(dú)的試管中將1000pg/mL標(biāo)準(zhǔn)品依次2倍倍比稀釋至6個(gè)梯度，共配制7個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，依次為: 1000pg/mL、 500pg/mL、 250pg/mL、 125pg/mL、 62.5pg/mL、 31.25pg/mL、 15.63pg/mL，從最高濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液中吸取500μL標(biāo)準(zhǔn)品到下一個(gè)試管中，輕輕吹打混勻，以此類推進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)品的倍比稀釋（如圖所示），1×稀釋液用作零濃度標(biāo)準(zhǔn)品(0pg/mL)。

抗體工作液配置
使用前10分鐘，將100×生物素化抗體于1000×g離心1分鐘，隨后用1×稀釋液將100×生物素化抗體稀釋成1×生物素化抗體工作液，根據(jù)所需用量當(dāng)日配置當(dāng)日使用。

酶結(jié)合物工作液配置
使用前10分鐘，將100×SA-HRP溶液于1000×g離心1分鐘，隨后用1×稀釋液將100×SA-HRP稀釋成1×SA-HRP工作液，根據(jù)所需用量配置。

備注：如待測樣本中CRN濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品最高值，請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況選擇適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。

結(jié)果的計(jì)算

計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)品和樣本復(fù)孔的平均OD值并減去空白孔的OD值作為校正值。以濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出四參數(shù)邏輯函數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)曲線(作圖時(shí)去掉空白組的值)。或者使用能夠生成四參數(shù)邏輯（4-P）曲線擬合的計(jì)算機(jī)軟件來創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。

若樣品OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限，應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測并在計(jì)算樣本濃度時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

示例數(shù)據(jù)

以下數(shù)據(jù)和曲線僅供參考，實(shí)驗(yàn)者需根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

標(biāo)準(zhǔn)品濃度(pg/mL)	1000	500	250	125	62.5	31.25	15.63	0
OD值	2.407	1.67	0.962	0.785	0.475	0.248	0.134	0.062
校正OD值	2.345	1.608	0.9	0.723	0.413	0.186	0.072	0

下圖所示標(biāo)準(zhǔn)曲線僅供示例，結(jié)果計(jì)算應(yīng)以同次試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)品所繪標(biāo)準(zhǔn)曲線為準(zhǔn)計(jì)算樣本結(jié)果

重復(fù)性

板內(nèi)變異系數(shù)小于10%，板間變異系數(shù)小于10%。

靈敏度

經(jīng)樣本測試，本試劑盒的檢測靈敏度為7.82pg/mL。

特異性

該試劑盒測定可識(shí)別重組小鼠CRN。

其他相關(guān)蛋白在稀釋緩沖液中制備為50ng/mL，并測定交叉反應(yīng)性。沒有觀察到明顯的交叉反應(yīng)。
使用ELISA試劑盒之前，請(qǐng)您必須完整閱讀說明書，本產(chǎn)品僅供科研使用，不能于臨床診斷或治療。

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小鼠Corin蛋白(CRN)ELISA試劑盒說明書
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ELISA試劑盒

PCR試劑盒

生化試劑盒

細(xì)胞系

細(xì)胞庫

基礎(chǔ)培養(yǎng)基

完全培養(yǎng)基

原代細(xì)胞

細(xì)胞專用培養(yǎng)基

菌株

生化試劑

病理染色液

科研抗體

標(biāo)準(zhǔn)品

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